NEFA Assay Kit er et værktøj til kvantificering af NEFA

NEFA Assay Kit er et værktøj til kvantificering af NEFA (Nitric Oxide). Det bruges til at bestemme koncentrationen af ​​NEFA i blod- eller vævsprøver. NEFA er et livsvigtigt næringsstof, der er ansvarlig for reguleringen af ​​energimetabolisme, hjerte-excitabilitet, neuromuskulær ledning, blodtryk og blodpropper. Det findes hovedsageligt i knogler, muskler, blødt væv og røde blodlegemer.

Forberedelse

NEFA er et lille, 50,2 kDa protein, der har evnen til at binde sig til DNA. Det er et cytosolisk type I fedtsyresyntase (FAS) kompleks, der producerer ikke-esterificeret palmitinsyre. I nærvær af Acyl-CoA-oxidase (ACS) oxiderer FAS-komplekset 3-methyl-N-ethyl-N-(b-hydroxyethyl)-anilin til 4-aminoantipyrin, som er den molekylære forløber for acetyl-CoA. Denne proces er en afgørende enzymatisk proces for alle eukaryote organismer.

Selvom NEFA måske ikke har den tunge masse af et fedtstof, er det en vigtig brændstofkilde til perifere væv. Det metaboliseres af leveren og transporteres kompleksbundet med albumin til perifere væv. NEFA frigives også af et thioesterase (TE) domæne af FAS-komplekset.

Pipettering

ELISA-sæt bruges til at påvise små kemiske forbindelser, proteiner og peptider. Disse kits er baseret på rekombinante proteiner udtrykt i E.coli. Sættene indeholder ikke azid, thimerosal og andre naturressourcer.

I sættet er der reagenser som BSA, pyrogenfri fortyndingsbuffer og vaskeopløsning. Vaskeopløsningen er stabil i to uger ved 2-8°C. Fortyndingsbufferen indeholder 0,9 % fysiologisk saltvand.

Sættet har en intern NEFA-standard. Dette tilsættes NEFA i en koncentration, der matcher den forventede koncentration i prøven. Absorbansen af ​​det blå-lilla pigment ved 546 nm måles for at beregne koncentrationen af ​​NEFA i prøven.

Kolorimetrisk

Brug af WAKO NEFA-sættet har fremkaldt en række forskellige resultater, inklusive nogle, der er meningsløse. Ikke desto mindre er NEFA-sættet en værdig udfordrer, når det kommer til at bestemme det relative fedtsyreindhold i dyrevævsprøver. Som sådan er NEFA-sættet en af ​​de mere populære laboratorietests. Sættet leveres med instruktioner til at teste forskellige typer prøver, herunder blod, serum, spyt og en række forskellige lipider.

Den mest spændende del af sættet er, at det kan bruges til at måle en række forskellige fedtsyrer, inklusive dem, der almindeligvis findes i lipider. Sættet leveres med en række enzymer designet til at detektere en række forskellige fedtsyrer, herunder C-8 og C-16 fedtsyrer, der findes i mennesker og dyr. Ikke desto mindre anbefales kittet ikke til brug i højpræcise FFA-koncentrationer over et bredt område.

Elektrokemisk

NEFA'er er vigtige fedtsyrer for menneskers sundhed, men vurderes sjældent. Derudover er deres påvisning meget dyr. Derfor kan overvågning af ændringer i deres koncentrationer hjælpe med mere præcis sygdomsforebyggelse og -håndtering. I denne undersøgelse blev der udviklet et elektrokemisk assay-kit til NEFA, der anvender PDA-MWCNT som sensoroverfladen. Denne elektrode udviste god elektrokatalytisk aktivitet til NEFA-oxidationstrin og kunne bruges i virkelige applikationer.

Enzymelektroden bestod af en flerlags kompositfilm af PDA-MWCNT og ACOD, ACS og polymer. Rækkefølgen af ​​lagene blev valgt til at matche den enzymatiske reaktionsrækkefølge. Det blev bestemt, at ACS og ACOD forblev biologisk aktive i filmen.

NEFA-koncentration i T2D

NEFA-koncentrationer i blodet er blevet undersøgt i forbindelse med fedme og hypertension. Disse forbindelser har vist sig at fremme BP-forhøjelse gennem a1-adrenerg stimulering og øge oxidant stress. NEFA'er er også forbundet med metabolisk syndrom. Disse forbindelser kan være vigtige i udviklingen af ​​hypertension.

Adskillige modeller er blevet foreslået til at beskrive plasma NEFA-responset på en intravenøs glukosebelastning. Boston-modellen skildrede nøjagtigt den fjerde fase af NEFA-koncentrationsforøgelsen. Modellen beskrev dog ikke den indledende latensfase. Fabian-modellen brugte en simpel eksponentiel hældning til at beskrive denne fase. På samme måde var Thomaseth-modellen ikke i stand til at beskrive rebound-fasen.

NEFA-niveauer i triglycerider

Adskillige undersøgelser har undersøgt virkningerne af fedmekirurgi på plasma NEFA-sammensætning. I en meta-analyse offentliggjort i 2016 blev serum-NEFA-niveauer faldet 6 og 12 måneder efter operationen. Dette kan have været på grund af reducerede insulinniveauer. I en anden undersøgelse blev plasma NEFA'er målt i en gruppe af overvægtige patienter før og efter Roux-en-Y gastrisk bypass-operation.

Koncentrationerne af syv NEFA'er blev reduceret 9 måneder efter operationen. Linoleat (en omega-6 fedtsyre) blev reduceret med 18:2, stearat med 18:0 og oleat med 16:0. Koncentrationen af ​​docosahexaenoat blev dog ikke påvirket. NEFA'er blev omdannet til fedtsyremethylestere (FAME'er). Disse blev derefter analyseret ved gaskromatografi-massespektrometri (GC-MS).